Ion Exchange Chromatography
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 80
Ion Exchange Chromatography
Ik doe momenteel een onderzoek naar ATP met behulp van een anion exchange chromatografie.
Gezien ATP hydrolyseert en dus bij het mengen met water ADP wordt gevormd wil ik de reactie juist niet laten verlopen. Ik dacht meer aan het mengen van ATP met methanol maar weet het niet zeker. Ook moet ik twee eluensen bereiden, waarvan de 1 is en de andere fles 100 mM NaCl bevat. Ik vroeg me af bij welke UV-spectrum ik het beste kan meten en bij welke verhouding als het gaat om het gebruik van de eluensen.
Gezien ATP hydrolyseert en dus bij het mengen met water ADP wordt gevormd wil ik de reactie juist niet laten verlopen. Ik dacht meer aan het mengen van ATP met methanol maar weet het niet zeker. Ook moet ik twee eluensen bereiden, waarvan de 1 is en de andere fles 100 mM NaCl bevat. Ik vroeg me af bij welke UV-spectrum ik het beste kan meten en bij welke verhouding als het gaat om het gebruik van de eluensen.
-
- Berichten: 244
Re: Ion Exchange Chromatography
Je doet onderzoek naar ATP... Wat wil je gaan onderzoeken? Wat is het doel?
Wat bedoel je precies met je UV spectrum? Om ATP mee te meten?
Met andere woorden: wees wat duidelijker, je verhaal is nogal vaag.
Wat bedoel je precies met je UV spectrum? Om ATP mee te meten?
Met andere woorden: wees wat duidelijker, je verhaal is nogal vaag.
-
- Berichten: 80
Re: Ion Exchange Chromatography
Mijn doel is om de polyphosphaten kwantitatief te onderzoeken en dit moet ik enkel doen met een 500 mM NaCl en demiwater. Omdat fosfaten vluchtig zijn weet ik niet hoe ik het moet analyseren :S
Het gaat om een ion exchange kolom vastgekoppeld aan een hplc-apparaat...
Het gaat om een ion exchange kolom vastgekoppeld aan een hplc-apparaat...
-
- Berichten: 244
Re: Ion Exchange Chromatography
Ja oke. Polyfosfaten vluchtig? ATP lijkt me nou niet echt vluchtig, helemaal niet eigenlijk. Groot molecuul, kan heel veel waterstofbruggen aangaan. Nee...
Je zegt dat je niet weet hoe je het moet analyseren. Kan neem ik aan toch gewoon met 500 mM NaCl en demiwater, aangezien je met je elektrostatische interacties tussen analyte en kolom gaat spelen?
UV-spectrum had je het eerder over... Dan neem ik aan dat je wil gaan kijken bij welke golflengte je het best kan meten? Het zou handig zijn om ook te weten wat voor UV detector je hebt. Een 'normale' of een DAD?
Je zegt dat je niet weet hoe je het moet analyseren. Kan neem ik aan toch gewoon met 500 mM NaCl en demiwater, aangezien je met je elektrostatische interacties tussen analyte en kolom gaat spelen?
UV-spectrum had je het eerder over... Dan neem ik aan dat je wil gaan kijken bij welke golflengte je het best kan meten? Het zou handig zijn om ook te weten wat voor UV detector je hebt. Een 'normale' of een DAD?
-
- Berichten: 80
Re: Ion Exchange Chromatography
De UV is 259 nm.
Maar waar ik mee zit is dat ik bij iedere bron aan informatie over de ionwisselingschromatografie het gebruik van een buffer weer terugvind. Terwijl ik dus juist geen buffer mag gebruiken.
En als je geen buffer gebruikt dan zal de stof niet ioniseren en kan ik de component niet analyseren, toch?
Maar waar ik mee zit is dat ik bij iedere bron aan informatie over de ionwisselingschromatografie het gebruik van een buffer weer terugvind. Terwijl ik dus juist geen buffer mag gebruiken.
En als je geen buffer gebruikt dan zal de stof niet ioniseren en kan ik de component niet analyseren, toch?
- Berichten: 10.564
Re: Ion Exchange Chromatography
Wees asjeblieft een beetje zorgvuldig met je termen. "De UV is...", "bij welk spectrum",
Je vraagt je kennelijk af bij welke golflengte je het beste kunt meten. Ik zou zeggen, zoek eens op hoe het UV-spectrum van ATP eruitziet. Zoeken op "UV ATP" levert talloze hits, de eerste naar een artikel dat een hele schat aan informatie zou kunnen geven. Dan kun je ook controleren of die 259 nm inderdaad juist is.
Vraag jezelf eens af wat de rol van buffer is, met betrekking tot de stoffen die normaal gesproken geanalyseerd worden, en het feit dat je geladen deeltjes nodig hebt.
Vraag je ook eens af onder welke omstandigheden ATP geladen is.
Verder: Enzymatisch verloopt de hydrolyse van ATP erg snel, gelukkig maar. Maar zonder enzymen, niet gekatalyseerd dus, is de snelheidsconstante in neutraal milieu in de orde 10-9 s-1, wat overeenkomt met een halfwaardetijd van tientallen jaren.
Je vraagt je kennelijk af bij welke golflengte je het beste kunt meten. Ik zou zeggen, zoek eens op hoe het UV-spectrum van ATP eruitziet. Zoeken op "UV ATP" levert talloze hits, de eerste naar een artikel dat een hele schat aan informatie zou kunnen geven. Dan kun je ook controleren of die 259 nm inderdaad juist is.
Vraag jezelf eens af wat de rol van buffer is, met betrekking tot de stoffen die normaal gesproken geanalyseerd worden, en het feit dat je geladen deeltjes nodig hebt.
Vraag je ook eens af onder welke omstandigheden ATP geladen is.
Verder: Enzymatisch verloopt de hydrolyse van ATP erg snel, gelukkig maar. Maar zonder enzymen, niet gekatalyseerd dus, is de snelheidsconstante in neutraal milieu in de orde 10-9 s-1, wat overeenkomt met een halfwaardetijd van tientallen jaren.
Cetero censeo Senseo non esse bibendum