Er wordt altijd gezegd dat wanneer je primers phosphoryleerd met T4-PNK (bv om te kloneren), dat je deze primers maar gedurende een korte tijd kunt gebruiken omdat de fosfaat groep niet stabiel zou zijn.
Maar hoe zit het met primers die je gemodificeerd koopt, dus met de 5'-P er al aan. Zijn die ook instabiel of kan ik die primers wel onbeperkt gebruiken.
Heeft iemand hier ervaring mee?
Laatste berichten
-
22:22
Ervaringen met "herontdekkingen" 9
-
21:28
hall effect in vloeistof gebruiken als stromingssensor 6
-
17:59
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij
-
17:28
Casus uit de praktijk: positief test THC 18
-
23:58
speciale rel. theorie 4
-
17 apr
Vreemde stank in huis 11
-
17 apr
3 vragen over mijn rooskleurige r.berekening H2netGekoppeldeHBrflowbatterij.
-
17 apr
Interpretatie reactie-energie 3
-
17 apr
Logistic equation (Pierre Verhulst,Belgian Mathematician) 5
-
16 apr
vB 9
-
15 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 1
-
15 apr
Python: sockets sluiten 4
-
14 apr
Een eenvoudige logische redenering waarom tijd niet kan bestaan 'daarbuiten' 6
-
14 apr
Hoe kun je op quantumwijze getallen vinden in een rij die kleiner zijn dan getal k 3
-
13 apr
Rotatie van het heelal 22
-
13 apr
Documentenverdwijnen uit onedrive 1
-
12 apr
Behoud van impulsmoment en energie 5
-
12 apr
INLOG STORING / TIPS 4
-
09 apr
[natuurkunde] systeemgrafen 1
-
05 apr
afbuiging licht rond zware objecten via grondbeginselen relativiteitstheorie 490
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Primer phosphorylatie
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 13
Re: Primer phosphorylatie
Hoi Theo,
Wanneer je primers besteld worden deze (bijna) altijd in gevriesdroogde vorm aangeleverd. Dit is een zeer stabiele manier van primers bewaren, er is geen water en ook nucleases kunnen niks doen.
Wanneer je de primers ontvangt los je ze op in nuclease-vrij water of een Tris EDTA oplossing (1xTE buffer). Beide zijn goed en voorkomen dat je primers degenereren.
Bewaar advies voor opgeloste primers is 4 graden voor korte tijd en -20 graden (vriezer) voor lange tijd.
Zelf doe ik T4 fosforylatie van primers altijd vlak voor gebruik van primers in kloneer reacties. Je hebt vaak genoeg primer om dit 100x te herhalen.
Wanneer je primers besteld worden deze (bijna) altijd in gevriesdroogde vorm aangeleverd. Dit is een zeer stabiele manier van primers bewaren, er is geen water en ook nucleases kunnen niks doen.
Wanneer je de primers ontvangt los je ze op in nuclease-vrij water of een Tris EDTA oplossing (1xTE buffer). Beide zijn goed en voorkomen dat je primers degenereren.
Bewaar advies voor opgeloste primers is 4 graden voor korte tijd en -20 graden (vriezer) voor lange tijd.
Zelf doe ik T4 fosforylatie van primers altijd vlak voor gebruik van primers in kloneer reacties. Je hebt vaak genoeg primer om dit 100x te herhalen.
-
- Berichten: 74
Re: Primer phosphorylatie
Hallo Colombo,
Bedankt voor je antwoord. Helaas is dit niet wat ik bedoel. Afbraak van de primers is geen probleem bij mij. De lengte van de primers is op gel precies zoals verwacht.
Ik gebruik grote primers om 3D structuren te maken. Daarbij moeten primers ook aan elkaar geligeerd worden. Die stap werkt niet erg efficient meer. Vandaar mijn vraag hoe het zit met de stabiliteit van een 5'-phospho groep aan een enkelstrengs primer.
Hopenlijk heeft daar iemand ervaring mee.
Bedankt voor je antwoord. Helaas is dit niet wat ik bedoel. Afbraak van de primers is geen probleem bij mij. De lengte van de primers is op gel precies zoals verwacht.
Ik gebruik grote primers om 3D structuren te maken. Daarbij moeten primers ook aan elkaar geligeerd worden. Die stap werkt niet erg efficient meer. Vandaar mijn vraag hoe het zit met de stabiliteit van een 5'-phospho groep aan een enkelstrengs primer.
Hopenlijk heeft daar iemand ervaring mee.
