Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Joey_analist

Hoi Iedereen,

Mijn onderzoek in het kort:

Ik ben bezig met mijn afstudeerstage en werk met RP-HPLC voor mijn onderzoek. Ik doe onderzoek naar degradatiecomonenten van bronopol. Ik weet al dat bronopol uiteen valt in 2-broom-2-nitroethanol, broomnitromethaan, nitromethaan, 2broomethanol en tris(hydroxymethyl)nitromethaan.

Mijn probleem:

Bij de analyses van degradatieproducten van bronopol vind ik een onbekend component. Dit component vind ik ook terug als degradatiecomponent bij de analyse van de referentiestof 2-broomethanol en is dus daarvan afkomstig.

Het component vertoont ook een kleine piek bij blanco metingen van mijn eluens van Methanol(99,95%)/Milli-Q/fosforzuur (50/50/0.1, v/v/v). Ik vermoed dat het een onzuiverheid in het methanol is wat deze piek veroorzaakt. Zou iemand aan de hand van deze informatie enig idee hebben welke component dit is, of wat ik zou kunnen doen om dit te onderzoeken?

Wat ik al heb onderzocht:

Ik weet dat ethanol niet goed te detecteren is op hplc maar heb tevens enkele oplossingen onderzocht om te zien of de piek niet door ethanol wordt veroorzaakt, aangezien dit een onzuiverheid in methanol kan zijn, en ook een degradatieproduct van 2-broomethanol kan zijn. Na het analyseren van 1,0% en 10% ethanoloplossingen bleek dat het geen ethanol kon zijn.

Alvast bedankt,

Joey

Kravitz

Opmerking moderator

Verplaatst naar het vakforum voor analytische chemie.

NW_

Goh het lijkt me een hele klus om te gaan uitvissen wat de verontreinigende component in de methanol is. Ik denk dat hier wel wat componenten voor in aanmerking kunnen komen. Kun je de component niet gaan identificeren met massaspectrometrie (LC-MS) ? (Of eventueel GC-MS aangezien methanol beter analyseerbaar is op GC dan op HPLC. door zijn vluchtigheid).

sanderdevink

Op een GC-MS moet dit inderdaad wel te doen zijn, denk dat je vrij snel de vervuiling zal vinden. Je kan natuurlijk ook eens je methanol op een vacuüm pomp zetten. En vervolgens weer meten, kijken of de vervuiling eruit is

Joey_analist

Bedankt voor de reacties, ik heb helaas alleen RP-HPLC(met DAD) tot mijn beschikking. Ik heb even twee chromatogrammen toegevoegd, dit denkt wat makkelijker mee volgens mij.

Bij het eerste plaatje heb ik de degradatie van bronopol(99% zuiver) geforceerd door de pH te verhogen naar 11. Bij Rt=2.638 is de onbekende piek te zien.

Bij het tweede plaatje heb ik de referentiestof 2-broomethanol(95% zuiver) gemeten. Bij Rt= 2.682 is de onbekende piek te zien.

Beide heb ik opgelost in MeOH/Milli-Q/fosforzuur (50/50/0.1, v/v/v)

In zowel methanol/milliQ als mijn eluens zie ik de onbekende piek met een laag signaal (tot 0,50mAU). Ik vermoed dat het degradatiecomponent wat ik zie toevallig dezelfde retentie vertoont als pieken veroorzaakt door mijn mobiele fase.

Verder heb ik nog geen idee wat dit degradatie component is.

sanderdevink

Omdat je de pH hebt verhoogt kan het dan niet zo zijn dat bepaalde componenten geladen worden? Stijgt boven de dissociation constant?

Ik weet dat er pieken verschuiven zodra dit gebeurd

NW_

Ai, vervelend dat je enkel een HPLC met DAD detector tot je beschikking hebt. Om dat ik ook wel geinteresseerd was in het probleem had ik zelf wat opgezocht. Ik had toen ergens gelezen dat onder hoge pH formaldehyde kan ontstaat uit bronopol. In een andere paper las ik dat twee vaak voorkomende vervuilingen (weliswaar in sporenconcentraties) aceton en formaldehyde kunnen zijn. Aangezien je ook melding maakt bij van een onbekende component bij hoge pH vermoed ik dat dit wel eens van formaldehyde zou kunnen afkomstig zijn.

Joey_analist

Sander, Ik zie dit component echter ook in mijn aangezuurde bronopol standaarden. Dit komt echter voor als spoor, maar is toch vele male hoger dan bij mijn blanco metingen.

En NW_ ik denk niet dat het formaldehyde is. Ik had deze namelijk al eerder onderzocht omdat ik wist dat deze stof bij veel van de degradatiestappen vrij komt. Formaldehyde gaf echter helemaal geen signaal tussen 190 en 800nm bij mijn volledige DAD scan (Ook niet bij hoge concentraties).

sanderdevink

Probeer eens je standaarden in een donkere ruimte te maken, dit geld ook voor je monsters. Zodra ze klaar zijn, zo snel mogelijk injecteren! Zorg ervoor dat je monster niet op warme plekken staan, bijv naast een HPLC! Bromopol valt sneller uit elkaar als het zich onder invloed van licht en warmte bevind!

Benm

Kun je geen UV/VIS spectrum vangen van die onbekende component met de detector van je hplc? Dat zou mogelijk een hint kunnen geven waar je het moet zoeken.

Als het mogelijk is de hplc preparatief te gebruiken (de onbekende piek + loopmiddel opvangen in een telpotje oid) is dat ook een goede manier om de onbekende stof in handen te krijgen. Hierop kun je vervolgens andere technieken toepassen om te zien wat het is - uv/vis/ir spectroscopie, maar desnoods ook MS of NMR, afhankelijk van hoe graag je het wil weten en wat je aan apparatuur beschikbaar hebt.

Joey_analist

@ sander: Helaas stop ik mijn standaarden na bereiden al in de koelkast of het gekoelde autosampler rek (Beide plekken zijn donker). En ik ben juist de degradatie aan het onderzoeken, vandaar dat ik graag wil weten wat het is, in plaat van te voorkomen dat het component ontstaat.

(in het kort gezegd wil ik eigenlijk de effecten van pH en temperatuur op bronopol in een matrix onderzoeken en ga ik dit component dus tegenkomen)

@Benm: En helaas lijken alle absorptie spectra op elkaar. Allemaal één piek bij 199-201nm, zonder unieke profielen. Het idee van de stof opvangen klinkt goed. Ik heb dit alleen nog nooit eerder gedaan, dus ik vroeg me af hoe ik erachter kan komen hoeveel tijd er zit tussen het passeren van de detector en het verlaten van het HPLC systeem. Ik zal daarnaast voorleggen om dat monster uit te besteden aan een lab die een LC-MS tot hun beschikking hebben.

sanderdevink

Op Benm aansluitend, mocht je geen MS meting kunnen regelen,dan kun je uit een NMR en IR al een redelijk molecuul structuur tekenen en die vergelijken met de degradatie producten!

Joey_analist

Ik heb even wat oude verslagen erbij gehaald van vorige stagiaires. Hierbij zag ik dat degene voor mij monsters heeft gemeten waarbij de kolom elke keer werd overbeladen door een component in die matrix. Ik heb enkele van deze monsters bereid en geanalyseerd met mijn methode en deze piek komt op dezelfde plek als mijn "degradatie component".

Het ziet er dus naar uit dat door het injecteren van blanco's en monsters dit component mogelijk nog steeds van de kolom af komt. En dat componenten zoals 2-broomethanol deze reactie bevorderen, waardoor deze piek dus groter wordt.

Ik zal als ik hier tijd voor heb, morgen tussen analyses door dit verder uitzoeken en jullie op de hoogte houden. In ieder geval bedankt voor de reacties en ik zal jullie advies opvolgen door het met een andere techniek te laten onderzoeken, mocht ik er zelf niet aan uitkomen.

Java

Wat denkt u over de polariteit van de onbekende component - type kolom ?

Methanol of ethanol kan niet rechtstreeks bepaald worden, misschien is derivatisering een optie ?

Indien het nitroethaan is dan zou ik geconc. NaOH toevoegen en via stoomdestillatie de rest laten overkomen. Het residu is dan het natrium zout van nitroethaan en kristalliseert na verloop van tijd. Toevoegen van geconc. zwavelzuur geeft via een Neff reactie de duidelijke geur van acetaldehyde.

Hopelijk helpt dit voor verder onderzoek.

Joey_analist

Even een korte update: Na wat testen blijkt dat de eerder bepaalde resolutie van een maand geleden veel slechter is geworden. De kolom is ook al enkele maanden in gebruik. Vandaar dat ik een nieuwe kolom ga bestellen. Als het component inderdaad door overbelading op de huidige kolom zit, dan zou de nieuwe kolom geen piek moeten vertonen. Dus ik ga er voorlopig niet meer tijd aan besteden omdat het vervangen van de kolom een mogelijk snelle eenvoudige oplossing is.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)

Re: Onbekend component van referentiestof ook in methanol? (RP-HPLC)