DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 5
DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
Hallo
Voor mijn opleiding ben ik een project gestart naar het identificeren van tonijnsoorten.
Dit wil ik gaan doen door middel van PCR. Ik heb de Primers van verschillende tonijnsoorten gevonden, maar er wordt gesproken van Amplicon in BP. Ik heb gelezen dat dit iets te maken heeft met de lengte van het DNA en dat deze het best tussen de 50 en 200 bp moet liggen. Maar wat betekent dit precies?
Voor mijn opleiding ben ik een project gestart naar het identificeren van tonijnsoorten.
Dit wil ik gaan doen door middel van PCR. Ik heb de Primers van verschillende tonijnsoorten gevonden, maar er wordt gesproken van Amplicon in BP. Ik heb gelezen dat dit iets te maken heeft met de lengte van het DNA en dat deze het best tussen de 50 en 200 bp moet liggen. Maar wat betekent dit precies?
- Berichten: 87
Re: DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
Het amplicon is simpelweg een andere naam voor je PCR product. De lengte hiervan wordt uitgedrukt in baseparen/basepairs, ofwel Bp. De plaatsing van je primers bepaald de lengte van je amplicon/PCR product
-
- Berichten: 5
Re: DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
Dankjewel voor je reactie! Waarom wordt er aanbevolen deze amplicon kort te kiezen? Wat is/zijn de gevolg(en) als deze te lang (bijv. rond de 600 bp) zijn?
- Berichten: 8.559
Re: DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
600 bp kan nog wel werken. De elongatie stap is korter als je een korter pcr product hebt. Ook zal het betekenen dat je het product niet zo lang op gel hoeft te zetten om duidelijk een bandje te zien. 200 bp gaat nu eenmaal vlotter op gel dan 600 bp.
"Meep meep meep." Beaker
-
- Berichten: 74
Re: DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
Een klein PCR product (100-150 bp) is met name van belang wanneer je een kwantitatieve PCR (qPCR) gaat uitvoeren. Voor een normale PCR zijn lengtes van 200-1000 bp helemaal geen probleem.HelpIzzy schreef: ↑do 03 apr 2014, 12:04
en dat deze het best tussen de 50 en 200 bp moet liggen. Maar wat betekent dit precies?
-
- Berichten: 83
Re: DNA onderzoek PCR 'amplicon' bij primers
verder is het ook van belang dat je rekening houdt met extensie tijd in de PCR reactie afhankelijk van de lengte.. DNA polymerases bouwen maar een bepaald aantal bp in per minuut...