Springen naar inhoud

HPLC - concentratiebepaling van component zonder standaarden


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Joey_analist

    Joey_analist


  • 0 - 25 berichten
  • 13 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 16 april 2014 - 16:20

Hoi iedereen,

 

Sorry voor de lange omschrijving van mijn probleem, maar ik kreeg het niet korter :) Ik loop bij mijn afstudeeropdracht tegen het volgende probleem aan, aangezien mijn begeleider geen diepgaande HPLC kennis heeft, probeer ik het hier.

 

Mijn probleem

Ik ben bezig met onderzoek naar de degradatie van Bronopol m.b.v. RP-HPLC (DAD). Ik weet dat bronopol uiteenvalt in verschillende componenten. Het wordt in mijn onderzoek echter voor het grootste gedeelte omgezet in 2-broom-2-nitroethanol(BNE). Daarom wil ik dit component juist kunnen kwantificeren. Hier is echter geen standaard voor verkrijgbaar, en deze zelf bereiden uit bronopol (volgens literatuurreferentie) is mij ook niet gelukt. 

 

Mijn voorkeur ging daarom uit naar % totale piekoppervlakte. Bij al mijn monsters is de begin concentratie van bronopol (wat degradeert naar BNE) hetzelfde. Echter door eerdere toevoeging van verschillende andere stoffen (drie pieken) in mijn onderzoek wordt het percentage van de totale piekoppervlakte wel beïnvloed. Daardoor wordt het % totale piekoppervlakte van 2-broom-2-nitroethanol beinvloed door toevoeging van deze andere componenten. Hierdoor kan ik geen hoeveelheid koppelen dit percentage van het totale piekoppervlakte

 

Graag wil ik de concentratie hiervan toch bepalen en het ook nog is correct verantwoord in mijn eindverslag hebben staan. Ik heb twee oplossingen bedacht, maar weet niet of deze goed genoeg zijn voor in mijn eindverslag. Graag hoor ik jullie mening hierover of een mogelijk andere oplossing voor mijn probleem.

 

Oplossing 1

De area's van de drie pieken niet betrekken bij het totale % piekoppervlakte. Oftewel de area's van componenten die ik heb toegevoegd van het totale piekoppervlake aftrekken en deze overgebleven piekoppervlakte vervolgens gebruiken als totale piekoppervlakte

 

Oplossing 2 (deze is wat vergezocht, maar dit is de enige oplossing die ik weet als de eerste niet kan)

Het bepalen van de relatieve retentie factor tussen bronopol en 2-broom-2-nitroethanol en van daaruit de concentratie berekenen van 2-broom-2-nitroethanol aan de hand van een bronopolstandaard. Door het volgende te doen, zie toegevoegde afbeelding:

BNP BNP degr.JPG

 

Ik had een bronopoloplossing bereid, stel deze was 100mol/l.

Bovenste plaatje= deze oplossing direct geanalyseerd.

Onderste plaatje= deze oplossing geanalyseerd na geforceerde degradatie door pH verhoging.

 

In het onderste plaatje kan ik zowel bronopol als BNM kwantificeren m.b.v. een kalibratie. Stel dat ik dus 30mol/l voor bronopol vind en 2 mol/l voor BNM. Kan ik dan de ontbrekende mol BNP toekennen aan BNE (Als ik de aanname maak dat alle componenten die kunnen ontstaan ook worden gedetecteerd).

 

Als ik dan mijn bronopol oplossing bij verschillende concentraties verdun en ik doe hetzelfde voor mijn geforceerde degradatie oplossing. Deze analyseer ik vervolgens. Dan kan ik in theorie bij verschillende area's verschillende concentraties van BNE toekennen. Hieruit kan ik de gevoeligheid of respons factor berekenen van BNE. Door deze te vergelijken met de respons factor van bronopol, kan ik in ieder geval een schatting maken naar de concentratie van 2-broom-2-nitroethanol(BNE).

 

Nu vraag ik mij dus af of ik dit zo kan doen, mits ik de aanname maak dat ik alle componenten die kunnen ontstaan ook daadwerkelijk detecteer. Ik denk allemaal dat dit dus tever gezocht is en dit niet gaat, graag hoor ik wat jullie hier over denken.

Veranderd door Joey_analist, 16 april 2014 - 16:28


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 9744 berichten
  • VIP

Geplaatst op 16 april 2014 - 17:29

Als ik zo naar dat bovenste chromatogram kijk dan zit vrijwel alles in die piek, dus de oppervlakte daarvan lijkt me een goede standaard, al zou je er best een procentje oid naast kunnen zitten.

Een aanpak met meerdere pieken bij elkaar optellen of van elkaar aftrekken zou wel kunnen, maar dan moeten al die stoffen dezelfde absorptiecoefficient hebben, en ik weet niet of dat hier het geval is?
Victory through technology

#3

Joey_analist

    Joey_analist


  • 0 - 25 berichten
  • 13 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 april 2014 - 08:00

Nee deze stoffen hebben allemaal een andere gevoeligheid. Dus ik kan niet op basis van area alleen een conclusie trekken. Graag zou ik door BNM en bronopol te kwantificeren de overige missende mollen per liter willen toekennen aan BNE. 

 

Dit is op basis van de aanname dat ik al de degradatiecomponenten kan detecteren en de twee degradatiecomponenten van bronopol de enige zijn die daadwerkelijk ontstaan. 

 

Als iemand een ander idee heeft of denkt dat dit gewoon niet kan. Dan hoor ik het graag!


#4

Marko

    Marko


  • >5k berichten
  • 9133 berichten
  • VIP

Geplaatst op 23 april 2014 - 10:17

Op zich kan het wel, ik denk dat het gegeven de omstandigheden je beste optie is. Je introduceert echter een enorm grote fout op je data, omdat er 4 meetfouten een rol spelen: die in de oorspronkelijke meting van bronoprol, en in de tweede meting die van bronoprol, die van BNM en die van alle componenten die niet boven de detectielimiet uitkwamen. Je doet de aanname dat je alles wat erin zit ook kunt detecteren, maar dat blijft een aanname.

Gezien het feit dat de BNE-piek de grootste van het stel is, kom je er enigzins mee weg, maar de meetfout blijft een stuk groter dan wat je normaal gesproken zou hebben bij een gekalibreerde meting op hetzelfde apparaat.

Voor het doen van een schatting van de concentratie is het wel een acceptabele methode.

Cetero censeo Senseo non esse bibendum


#5

Joey_analist

    Joey_analist


  • 0 - 25 berichten
  • 13 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 24 april 2014 - 09:55

Bedankt voor je duidelijke reactie. Ik neem genoegen met het maken van een schatting en de meetfouten die ontstaan zal ik betrekken bij mijn conclusie.






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures