Wetenschapsforum

Beste allemaal, 
 
 
Ik maak een verslag over een experiment en heb een aantal vragen
 

• Hoe bereken ik de enzymactiviteit van alkalische fosfatase in het monster in U/L.
• Mijn Michaelis-Menten grafiek loopt op het einde bij substraatconcentratie 20 mmol/L wel erg naar beneden ipv als een constante(re) lijn. Hoe kan ik dit verklaren (bij de discussie)? Dacht zelf aan een pipetteerfout maar is dit niet te standaard? Wat kunnen nog meer eventuele mogelijkheden zijn?
• Kloppen mijn Vmax en Km? Zijn de waarden enigszins goed? Kom ik op logische waarden uit?
• Hoe geef ik aan in de plot wat de Vmax en KM waarden van alkalische fosfatase zijn
• Opdracht: Bespreek de enzymkinetiek, komen de bepalingen van de Vmax en de KM uit de Michaëlis-Menten curve en de Lineweaver-Burkplot met elkaar overeen?  -> hoe moet ik dit doen? Ik heb geen idee…

 
 
Het doel van het experiment is om van een serummonster de enzymactiviteit van alkalische fosfatase te bepalen, ofwel: er wordt gekeken naar de snelheid waarmee een enzym zijn substraat omzet. Het serum is afkomstig van een patiënt en er wordt onderzocht of er afwijkingen zijn. 
 
 
Methode
Uit de [20 mmol/l] p-NPP stockoplossing zijn de volgende verdunningen gemaakt in H2O dest: 3x; 9x; 27x; 81x; 243x. Zie hieronder het pipetteerschema dat hierbij hoort:
Buis 1 (onverdund, 3000 µl substraat).
 1 mL over pipetteren in buis 2 + 2 mL demiwater 
Buis 2 (3x verdund, 1000/3 = 333µl substraat).
             1 mL over pipetteren in buis 3 + 2 mL demiwater.
Buis 3 (9x verdund, 1000/9 = 111µl substraat).
 1 mL over pipetteren in buis 4 + 2 mL demiwater.
Buis 4 (27x verdund, 1000/27 = 37µl substraat).
 1 mL over pipetteren in buis 5 + 2 mL demiwater.
Buis 5 (81x verdund, 1000/81 = 12µl substraat).            
 1 mL over pipetteren in buis 6 + 2 mL demiwater.
Buis 6 (243x verdund, 1000/243 = 4µl substraat).
 
 
 
Dit hele proces is in een tijdsschema hieronder gezet: De extinctiewaarden zijn: Mijn Michaelis-Menten grafiek loopt op het einde bij substraatconcentratie 20 mmol/L wel erg naar beneden ipv als een constante(re) lijn. Hoe kan ik dit verklaren (bij de discussie)? Dacht zelf aan een pipetteerfout maar is dit niet te standaard? Wat kunnen nog meer eventuele mogelijkheden zijn?   Kloppen mijn Vmax en Km? Zijn de waarden enigszins goed? Kom ik op logische waarden uit? Mijn docent vond ze laag, enig idee waarom dit zo zou kunnen zijn?
 
Hier mijn Lineweaver-burkplot

• Hoe geef ik aan in de plot wat de Vmax en KM waarden van alkalische fosfatase zijn
• Opdracht: Bespreek de enzymkinetiek, komen de bepalingen van de Vmax en de KM uit de Michaëlis-Menten curve en de Lineweaver-Burkplot met elkaar overeen?  -> hoe moet ik dit doen? Ik heb geen idee…

 
Graag hoor ik van jullie!
 
Groetjes Joy