Springen naar inhoud

practicum fysio/biochemie



  • Log in om te kunnen reageren

#1

SaraHendrickxs

    SaraHendrickxs


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 15 april 2018 - 16:31

Dit is een heel lang vraagstukken, waarbij ik denk vele gegevens onnodig zijn. Vraag a heb ik al kunnen oplossen, maar bij vraag b zit ik vast. Heeft er iemand enig idee welke stappen ik moet volgen?

 

Alvast bedankt

 

 

 

Het glycolaat-oxidase is een peroxisomaal enzyme. Het katalyseert de oxidatie van glycolaat tot glyoxylaat en vormt hierbij een molecule H2O2. Het gezuiverde enzyme heeft een Kvan 15 μM (voor glycolaat) en een Vmax van 23 μmol/(min mg).

De procedure voor de bepaling van de enzymatische activiteit ziet er als volgt uit:

  1. Een bepaalde hoeveelheid van een 100 μM oplossing van glycolaat wordt aange- lengd tot 250 μL met een 50 mM fosfaatbuffer (pH 5,5) en hieraan wordt 50 μL van een (8 x verdund) extract van spinazieblaadjes toegevoegd.

  2. Dit blijft 10 minuten staan in een warmwaterbad bij 30°C.

  3. Om de reactie te stoppen, wordt 95 μL azijnzuur (2 M) toegevoegd.

  4. Hierbij wordt nog 5 μL pyranine (concentratie in overmaat) gepipetteerd. Het pyranine gaat reageren met het aanwezige H2O(in een 1:1 stoechiometrische verhouding) en het reactieproduct kan dan spectrofotometrisch worden bepaald (ε320 = 10,mM1cm1).

  5. De proef wordt uitgevoerd in een microtiterplaat - de lengte van de lichtstraal door de gekleurde oplossing is bijgevolg 4 mm.

Ga er van uit dat in het onverdunde extract 1,15 mg eiwit per mL zit. 5 % van de totale hoeveelheid eiwit in het extract is het gezochte glycolaat-oxidase. Hou geen rekening met aspecifieke afbraak van het glycolaat want daarbij wordt toch geen H2Ogevormd.

  1. (a)  Reken uit hoeveel glycolaat moet worden toegevoegd vanuit de 100 μM stock om een eindconcentratie van 2 μM in het reactiebuisje (dus vóór het stoppen van de reactie!) te bekomen.

  2. (b)  Voorspel de correcte OD-waarden bij de bepaling van het glycolaat-oxidase bij een substraatsconcentratie van het 20 μM glycolaat.

 


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

ArcherBarry

    ArcherBarry


  • >1k berichten
  • 4298 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 16 april 2018 - 21:32

Geef svp eerst jouw gevonden antwoord(en)

Niet geschoten is altijd mis, en te snel schieten vaak ook.
 
Pas op! Chocolade kan je kleding laten krimpen!

#3

NW_

    NW_


  • >250 berichten
  • 698 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 april 2018 - 21:51

Voor je tweede vraag lijkt het mij erop dat je dit kunt doen door mbv de gegeven data een kinetisch model op te stellen waarmee je de enzymkinetiek kan beschrijven (genre michaelis-menten of lineaweaver burke, geen idee wat je gezien hebt in je cursus). Wel zul je moeten nakijken hoe de OD precies gerelateerd is aan concentratie aan glycolaat.






Also tagged with one or more of these keywords: scheikunde

0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures