Voor een practicum moet ik een Lowry eiwit bepaling uitvoeren met sport eiwit. Echter mislukt dit steeds omdat de oplossingen bijna zwart worden wanneer er Folin reagens aan toe wordt gevoegd. Ik ben begonnen met een kalibratielijn van 3 mg/ml sport eiwit t/m 30 mg/ml sport eiwit. Samen met reagens D (wordt gemaakt door onderstaande oplossingen A, B, en C in verhouding 48:1:1 aan elkaar toe te voegen) leken de oplossingen nog goed. Echter moet er daarna Folin reagens aan toe worden gevoegd en hier ging het dus mis. De oplossingen worden dan bijna zwart. Omdat de oplossingen van de kalibratielijn zonder reagens D en Folin reagens al erg troebel leken heb ik besloten om een oplossing te maken met een lagere eiwit concentratie, namelijk 1 mg/ml. Met reagens D bij deze oplossing leek het goed te gaan, maar toen er Folin reagens bij werd gedaan kleurde de oplossing meteen weer zwart. Ook vindt er scheiding plaats tussen het Folin reagens en de andere stoffen in de oplossing. Ik heb het Folin reagens bereid door 1 deel Folin reagens te mengen met 1 deel water. Het Folin reagens is 2M. Weet iemand wat er verkeerd gaat? Mijn voorschrift is onderstaand te vinden. In de eerste afbeelding is de kalibratielijn te zien met reagens D en Folin reagens. In de tweede afbeelding is de 1 mg/ml eiwit oplossing weergegeven met Folin reagens, hier vindt een duidelijke scheiding in plaats. In de derde afbeelding is de kalibratielijn met alleen sport eiwit oplossing weergegeven, deze is al redelijk troebel. Ten slotte is in afbeelding 4 de kalibratielijn met reagens D weergegeven.
A. 2 gram Na2CO3 in 100 ml 0.1 M NaOH
B. 1 gram NaK Tartrate in 100 ml H2O
C. 0.5 gram CuSO4.5H2O in 100 ml demiwater
1. Maak een kalibratielijn van sport eiwit.
2. Maak reagens D door oplossingen A, B en C bij elkaar te voegen in de verhouding 48:1:1.
3. Voeg 4 ml van reagens D toe aan alle oplossingen van de kalibratielijn.
4. Meng goed en laat de oplossingen daarna 10 minuten in het donker staan.
5. Meng 1 deel Folin reagens met 1 deel water.
6. Voeg 1 ml Folin reagens toe aan alle oplossingen van de kalibratielijn.
7. Meng goed en laat de oplossingen daarna 30 minuten in het donker staan.
8. Stel ondertussen de spectrofotometer in op 590 nm.
9. Meet na 30 minuten de oplossingen met behulp van de spectrofotometer.
- kalibratielijn met folin reagens.jpg (74.49 KiB) 519 keer bekeken
- eiwit oplossing met folin 1mgml.jpg (34.91 KiB) 518 keer bekeken
- kalibratielijn alleen eiwit.jpg (75.18 KiB) 518 keer bekeken
- eiwit kalibratielijn met oplossing D.jpg (67.95 KiB) 519 keer bekeken
