zout precipitaie van verschillende collagenen

Moderator: ArcherBarry

Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
Reageer
Berichten: 28

zout precipitaie van verschillende collagenen

Ik wil verschillende types collageen isoleren uit weefsels. Ik heb de weefsels gemaald en laten incuberen met guanidine-hcl om de proteoglycanen kwijt te raken. Daarna heb ik het geknipt met pepsine.

Maar nu?

Ik heb een oud protocol waarmee type II, IX en XI neergeslagen kunnen worden met dialyse. Maar ik wil ook andere types. Ik heb rondgezocht en kwam iets tegen over NaCl precipitatie, nl:

2.5 M voor type I

0.9 M type II

1.8 M type III

1.8 M type IX

1.2 M alfa 1, 2 en 3 van type IX.

Krijg ik nou dus bij 1.8 M zowel type III als IX?

En ik wil ook graag zowiezo type VI en XI, weten jullie daar iets voor? Het mag ook een totaal ander protocol zijn, maar graag wel met dialyse of zout-precipitatie.

Gebruikersavatar
Berichten: 8.557

Re: zout precipitaie van verschillende collagenen

Bij 1,8 M (ammoniumfosfaat) krijg je inderdaad zowel type III als type IX.

Het doel van dialyse is niet om eiwitten neer te slaan. Je verlaagd hierbij de zoutconcentratie

Als je eiwitten moet scheiden die heel veel op elkaar lijken dan zal dit lang niet altijd goed lukken met uitzouting. Je zou een FPLC als mogelijkheid kunnen bekijken. Het hangt natuurlijk af van de zuiverheid die je wilt verkrijgen. Een zo hoog mogelijke zuiverheid wordt verkregen door een ELISA uit te voeren.
"Meep meep meep." Beaker

Berichten: 28

Re: zout precipitaie van verschillende collagenen

Klopt, met dialyse krijg je de juiste zoutconcentratie terwijl je wat andere moleculen uit je oplossing haalt.

Maar NaCl werkt toch ook net als ammoniumfosfaat?

En ik gebruik nu deze methode omdat deze heel goedkoop is itt andere methoden.
FRET: de beste uitvinding sinds het gesneden brood.

Gebruikersavatar
Berichten: 8.557

Re: zout precipitaie van verschillende collagenen

Ammonium fosfaat wordt van oudsher gebruikt. Ik zie geen principiële nadelen aan NaCl, echter als er altijd ammonium fosfaat wordt gebruikt, wie ben ik dan om daar van af te wijken.
"Meep meep meep." Beaker

Reageer