Wetenschapsforum

Hallo,

Ik heb een practica waarbij SDS-PAGE ga doen met vissen...

Ik moet een stroomschema maken en ik weet niet waarvoor sommige stoffen dienen in de oplossingen die ik moet maken....

Oplossingen:

* Sample-buffer: Ingevroren in epjes van 1,5 ml

1,88 ml TRIS oplossing pH 6,8 (121 g Tris per liter, pH 6,8 (~83 ml HCL (12M))

6,0 ml demiwater

3,0 ml glycerol

231 mg Dithiotreitol (DTT) Helpt om zoveel mogelijk SDS te absorberen dat de eigen ladingen geen belangrijke rol meer spelen en dat ze volledig ontvouwen zijn.

2,0 mg Broomfenolblauw per 15 ml Dient als marker en kleurt alles irreversibel blauw.

Aanvullen met demiwater tot 15 ml

* SET-buffer (bewaren in koelkast)

0,25 M Sucrose

1mM EDTA (ethyleen-diamine-tetra-azijnzuur)

1mM TRIS

* Ontkleuringsvloeistof

96% methanol oplossing: 4 delen (40%)

10% ijsazijn-oplossing: 1 deel (10%)

Demiwater : 5 delen (50%)

* Coomasie Briljant Blue-oplossing:

40% methanol, 10% ijsazijn, 0,25 w/v% Coomassie Briljant Blue R-250

* TGS 1x: (de 10x TGS 10 keer verdunnen)

25 mM Tris

192 mM glycine

0,1% (w/v) SDS pH 8,3

* SDS 0,1%

Los 1 g SDS op in 10 ml demiwater (rustig roeren) SDS ontvouwt het eiwit (H-bruggen worden verbroken) en krijgt het een negatieve lading.

Mijn vraag is: Waarom gebruik ik de SET-buffer (ik zie nergens in mijn voorschrift waarvoor ik het moet gebruiken)??

Wat is het verschil tussen het kleuren met CBB en zilverkleuring??

Waarvoor gebruik ik in de sample-buffer glycerol en in de TGS glysine??

TGS doe ik in de electroforese bak, maar wat doet deze oplossing precies??

Wie kan mij opweg helpen met antwoorden of internetsites???

Alvast heel erg bedankt....