Wetenschapsforum

Giulia

Hoi, ik had een vraagje ivm SDS. Ik vind op internet nl tegenstrijdige verklaringen.

Is het zo dat SDS er ook voor zorgt dat een multisubunit eiwit uiteenvalt in z'n samenstellende polypeptideketens (die bvb door disulfidebruggen verbonden zijn)?

Als dat zo is, dan snap ik niet echt het nut van eiwitscheiding via SDS-PAGE: als je aan een eiwitmix eerst SDS toevoegt (en eiwitten dus in hun subunits uiteenvallen) en je de mix vervolgens wil scheiden door gelelektroforese, dan zitten je polypeptideketens toch allemaal door elkaar en heb je toch niets aan je scheiding?

Alvast bedankt!

Julie

lucilius

http://en.wikipedia.org/wiki/SDS-PAGE

dit kan al helpen, is redelijk goed en accuraat.

Verder: ik snap je vraag niet volledig.

Bij sds ga je scheiden op basis van grootte (elk eiwit fel negatief geladen, dus allemaal "zelfde" lading). Dat de eiwitten door elkaar zitten, geeft niet. Je gaat ze toch net scheiden? De eiwitten zitten toch sowieso door elkaar?

Wat de invloed van sds is: wat bedoel je juist met een multisubunit?

Giulia

Multisubunit = eiwit dat uit verschillende polypeptideketens bestaat

Misschien eerst dit nog: zijn bij een eiwit dat uit verschillende polypeptideketens bestaat die ketens steeds covalent met elkaar verbonden? Zoja, op welke mogelijke manieren dan (naast disulfidebruggen)?

Ik zal het op een andere manier proberen te formuleren.

Stel: je hebt een eiwitmengsel dat eiwitten bevat die uit verschillende polypeptideketens bestaan (verbonden door disulfidebruggen)

Is het dan zo dat bij toevoeging van SDS die disulfidebruggen (of andere eventuele verbindingen tussen de polypeptideketens) verbroken worden en de verschillende eiwitten dus in hun onderdelen uiteen vallen?

(hier zit eigenlijk mijn probleem)

Alvast bedankt

Julie

Wouter_Masselink

Kortweg gezegt, ja. Bij SDS-page creer je gelijk geladen peptideketens, welke zijn geliniariseert. Dit zorgt er uiteindelijk voor dat een massa scheiding ontstaat. Voor een eiwit wat uit meerdere subunits bestaat, zal dit resulteren in verschillende fracties.

Marko

Voor de volledigheid: Disulfidebindingen worden daarbij toch niet verbroken? Dus alleen subunits die via H-bruggen of andere niet-covalente interacties verbonden zijn, vallen uiteen(?)

Wouter_Masselink

Disulfide bindingen worden ook verbroken bij het uitvoeren van een SDS-page. Echter dit is niet toe te schrijven aan SDS maar aan 2-mercaptoethanol.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Sds

Sds

Re: Sds

Re: Sds

Re: Sds

Re: Sds

Re: Sds