[biologie] DNA isolatie met prepGEM - iemand ervaring?

Moderators: ArcherBarry, Drieske, Fuzzwood

Reageer
Berichten: 4

DNA isolatie met prepGEM - iemand ervaring?

Hallo,



Voor een project is het de bedoeling dat wij fraude in vlees aantonen aan de hand van DNA.

Hiervoor moeten wij eerst het DNA uit het vlees isoleren. Hiervoor hebben wij een protocol aangeleverd gekregen die wij moeten gebruiken.

Dit is het protocol van zygem: DNA Extraction Using prepGEM® Tissue. Het viel ons op dat dit protocol aanzienlijk korter is dan de normale protocollen die wij hebben gezien aangaande DNA isolatie. Wij vroegen ons dus af of iemand ervaring heeft met deze kit en ons kan vertellen wat deze kit precies doet met de bijbehorende reagentia. Wat gebeurt er precies per stap?



Protocol (in het engels): (is overigens op internet te vinden)

Extraction



1. Add:

89 µl DNA-free water.

10 µl of 10x Buffer

1 µl prepGEM



2. Incubate:

75°C for [15 minutes for SOLID TISSUE] [5 minutes for TISSUE CULTURE]

95°C for 5 minutes



A thermal cycler can be used for this step



3. For solid tissue, aspirate the extract away from residual material. The DNA is in this solution. Do not discard.

For long term storage of the extracted DNA, add TE buffer to 1x (10x Buffer is: 100 mM Tris, pH 7.5, 10 mM EDTA). Store at -20°C





Alvast bedankt.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.
Gebruikersavatar
Berichten: 8.487

Re: DNA isolatie met prepGEM - iemand ervaring?

Ik ben niet specifiek met die methode bekend maar het lijkt op de NaOH DNA isolatie methode om een quick-and-dirty DNA isolatie uit te voeren. Voor genotyping is dit prima geschikt.
 
Truett GE et al. 2000. Biotechniques 29(1):52-54
 
  • Cut 2mm of tail and place into an Eppendorf tube or 96-well plate.
  • Add 75ul 25mM NaOH / 0.2 mM EDTA.
  • Place in thermocycler at 98ºC for 1 hour, then reduce the temperature to 15°C until ready to proceed to the next step.
  • Add 75ul of 40 mM Tris HCl (pH 5.5).
  • Centrifuge at 4000rpm for 3 minutes.
  • Take an aliquot for PCR (use 2 ul undiluted, or 2 ul of a 1:100 dilution/reaction).
Als dat inderdaad het geval is dan wordt er op die kit goed verdient. Echter aangezien ik niet met zekerheid kan stellen dat dit in principe dezelfde methode is, en wat er in de buffer en prepgem zit niet staat aangegeven is het niet te zeggen hoe ze werken.
"Meep meep meep." Beaker

Reageer