Eiwitten extraheren

LvS_CF

Hoi,

Wij (mijn pws partner en ik) willen voor ons profielwerkstuk (pws)

verschillende voedingsmiddelen analyseren o.a. vetgehalte, suikers en eiwitten

het vet kun je extraheren door te soxhletten met wasbenzine, de suiker kun je oplossen in water.

maar waarin kun je eiwitten oplossen zodat je met een reagens en een fotospectrometer de hoeveelheid kunt bepalen?

alvast bedankt

LVS

Fuzzwood

Ik hoop echt dat je weet dat er heel veel verschillende vetten, suikers en eiwitten bestaan, en dat "eiwit" bepalen dus niet bestaat.

De meest logische vraag is dan: welk eiwit?

Marjanne

Als je in de NEN-normen kijkt naar de bepaling van eiwit, dan zie je consequent terug dat eerst het gehalte aan stikstof volgens Kjeldahl wordt bepaald. Dit bestaat uit het koken van het monster met geconcentreerd zwavelzuur en koper of seleen als katalysator. Het gehalte aan stikstof wordt gemeten en op een of andere manier teruggerekend naar een (ruw) eiwitgehalte.

Deze formule weet ik niet en kan ik zonder betaling ook niet uit de NEn-normen halen. Maar wellicht is er iemand die met levensmiddelenanalyse te maken heeft en dit wel weet/kan opzoeken.

LvS_CF

Ik bedoel eiwit in de zin zoals het aangegeven staat op verpakkingen van levensmiddelen. ik neem aan dat ze niet ieder mogelijk (zijn er heeeel veel) eiwit gaan analyseren.

ook weet ik zeker wel dat er verschillende soorten vetten, suikers en eiwitten bestaan, maar het gaat om gehalte bepaling zoals die ook op een verpakking moet staan

is en stikstofgehalte bepaling volgens "Kjeldahl" uit te voeren op een middelbare school??(ik zal niet meteen vragen hoe het werkt maar eerts effe googlen)

alsvast hartelijk dank

LVS

Roy van Heesbeen

moet wel kunnen, de meeste spullen zijn op een school wel aanwezig denk ik...

The Herminator

Voor zulke algemene eiwit-bepalingen (het gaat om totale hoeveelheid eiwit, niet om speciefieke eiwitten!) zijn er veel verschillende methodes, kijk bijv. maar even hier -> klik.

Wat doenlijk is, is natuurlijk afhankelijk van de apparatuur die jullie op school hebben staan...... zoek even op Google ("determination protein" geeft 19 miljoen hits, "eiwit-bepaling" 400), dan krijg je een idee van wat de mogelijkheden zijn!

Napoleon1981

Mooie link herman,

Alles hangt af van de matrix zoals je in Herman zijn link kunt zien. De detectie methode zelf is ook van belang. Het is niet mogelijk/makkelijk zomaar eiwitten te extraheren, zoals dat wel vaak gaat met kleine molecullen. Je kunt ze wel bijvoorbeeld dialyseren of scheiden op molecuul grote.

Roy van Heesbeen

Ik gebruik zelf altijd de Braford methode, snel en erg gemakkelijk uit te voeren.

Je moet echter wel een microtiterplate-reader hebben... Deze zijn niet op een middelbare school aanwezig.

Je kan voor eventuele praktijk componenten binnen je werkstuk ook een Hogeschool of universiteit benaderen. Deze instellingen willen je in de meeste gevallen wel helpen met een paar kleine experimenten.

LvS_CF

op school hebben wij al het "standaart" glaswerk etc. wat je op een school kunt verwachten, verder hebben wij een fotospectrometer en een gas-chromatograaf

maar zoals Marjanne al poste, volgens de NEN-normen wordt de kjeldahl methode gebruikt en zij willen onze meetwaarden kunnen vergelijken met de waarden die op de verpakking staan gegeven.

Meneer Kjeldahl heeft deze methode eind 19e eeuw uitgevonden dus zonder allerlei geavanceerde apparatuur etc. logischerwijs zou je dus zeggen dat het niet zo moeilijk is zijn methode met normaal lab-spul te laten werken. allen kan ik hiervan weinig op internet vinden. iemand een idee??

alweer Hartelijk bedankt

Luuk

PS: de verhouding massa eiwitten / massa stikstof = +/-6,25

bteunissen

Voor een handige pdf file over een Kjeldahl bepaling: -->HIER

Met een mooi plaatje van een opstelling dat je vast en zeker na kan bouwen op school:

Afbeelding

Bas

Gerard

Een link naar een verslag en de analyse van magarine.

Mischien dat dit je verder helpt.

http://www.havovwo.nl/vwo/vsk/bestanden/vs...%20in%20melk%22

LvS_CF

Bedankt voor de foto en file, Bas,

in de file gaat men ook weer uit van een stoomdestillatie-apparaat en een destructie toestel, verder gebruikt men Nessler reagens (wij mogen op school geen kwikverbindingen gebruiken).

maar nu dachten wij dit:

het sample te "koken" met 37% zwavelzuur en op deze manier van alle gebonden stikstof NH₄⁺ te maken.

deze zure oplossing te neutraliseren met voldoende H₂O (ik weet het: water op zuur komt mij duur!) Afbeelding

daarna te koelen en vast NaOH toevoegen tot de pH +/- 9 is

dan te destilleren NH₄⁺+OH^--->NH₃+H₂O (zie opstelling van Bas)

de NH₃ op te vangen in een gestelde boorzuur oplossing en te titreren met NaOH en HCL (naar gelang de pH)

iemand opmerkingen / suggesties???

alweer Hartelijk dank, Luuk

PS: in de tekening wordt bij "trap" een spatbol bedoeld??, en waarvoor dient deze

Fuzzwood

Je wil alleen ammoniak in je opvangkolf, en geen opspattend vloeistof

Marjanne

het sample te "koken" met 37% zwavelzuur en op deze manier van alle gebonden stikstof NH4+ te maken.

deze zure oplossing te neutraliseren met voldoende H2O (ik weet het: water op zuur komt mij duur!)

daarna te koelen en vast NaOH toevoegen tot de pH +/- 9 is

dan te destilleren NH4++OH--->NH3+H2O (zie opstelling van Bas)

de NH3 op te vangen in een gestelde boorzuur oplossing en te titreren met NaOH en HCL (naar gelang de pH)

Opzet lijkt mij prima. Het toevoegen van water aan het destruaat valt, qua risico, erg mee. Voorzichtig toevoegen en direct homogeniseren.

Het titreren gaat met zuur: zoutzuur, of nog beter: zwavelzuur (volgens de NEN-norm).

Het is gebruikelijk om bij het koken met zwavelzuur een katalysator toe te voegen. Hier wordt kaliumsulfaat voor gebruikt, al of niet in combinatie met metallisch seleen of metallisch koper.

De noodzaak van het metaal hangt af van de hoedanigheid van het monster.

Als het je helpt dan kan ik hoeveelheden reagentia e.d. en de werkwijze naar je mailen, van NEN-norm 3235-6.5 uit 1972. Deze werkt op dezelfde wijze als jij hierboven beschrijft.

Fuzzwood

Een goede manier om direct te homogeniseren is om het zaakje op een roermotor te zetten en een roervlo in de kolf te stoppen, die je dus op ongeveer 750 rpm laat rondtollen. (Nu weet ik even niet of zo'n vlo wel geconcentreerd zwavelzuur aankan)

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Eiwitten extraheren

Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren

Re: Eiwitten extraheren