Bij de aanmaak van een recombinant proteïne moeten we eerst het mRNA dat codeert voor dit eiwit, afzonderen met behulp van kolomchromatografie.
We gebruiken dus een oligo-(dT)-kolom, aangezien mRNA op het 3'OH uiteinde gepolyadenyleerd is en dus weerhouden wordt op de kolom. Als het andere RNA en DNA (verkregen uit gehomogeniseerde cellen) weggeëlueerd is, moeten we uiteraard het mRNA nog af de kolom krijgen, dit kunnen we blijkbaar doen door de ionische sterkte te VERLAGEN. Hoe doe je dit? Verhogen is simpel, maar verlagen?
Alvast bedankt!
Laatste berichten
-
08:29
Programmeren met vectoren 5
-
23:12
speciale rel. theorie 10
-
22:57
Straatklok loopt 5 minuten voor 11
-
22:57
wig 6
-
22:36
Gravity and gravitation 4
-
22:24
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 10
-
19:47
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
19:44
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
19:12
Rood laserlicht 3
-
17:30
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
16:34
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
13:57
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
13:16
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
13:12
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Ionische sterkte verlagen
Moderator: ArcherBarry
Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
-
- Berichten: 6.853
Re: Ionische sterkte verlagen
Ik weet hier niets van, maar het klinkt alsof toevoegen van water (verdunnen) zou kunnen helpen?
-
- Berichten: 9
Re: Ionische sterkte verlagen
Dat dacht ik zelf ook al, maar lijkt me zo verdacht gemakkelijk 
-
- Berichten: 2.399
Re: Ionische sterkte verlagen
Gewoon elueren in gedemineraliseerd water als dat het mechanisme is.
Re: Ionische sterkte verlagen
Het is niet mijn terrein maar op puur water en eiwitten heb ik het niet zo, ik zou toch heel zwak bufferen om de pH te stabilliseren.
-
- Berichten: 516
Re: Ionische sterkte verlagen
Nee, niet met water.
Kijk, je bindt hier eigenlijk twee strengen aan elkaar. De primer (hier bestaande uit oligo-dT) laat je hybridiseren met de polyA-staart van het mRNA. De twee strengen zitten dus aan elkaar vast via de gebruikelijke waterstofbruggen. En indien mogelijk zitten ze nog lekker in een een helixvorm. Je moet deze binding dus goed kunnen breken. En dat gaat (naar mijn inziens) niet met water.
Ik dacht dat je de pH wat moest verhogen, zodat de strengen denatureren, dan zullen ze mee uitlogen.
Ik kan ook volledig mis zitten, ik ben namelijk geen expert!
Kijk, je bindt hier eigenlijk twee strengen aan elkaar. De primer (hier bestaande uit oligo-dT) laat je hybridiseren met de polyA-staart van het mRNA. De twee strengen zitten dus aan elkaar vast via de gebruikelijke waterstofbruggen. En indien mogelijk zitten ze nog lekker in een een helixvorm. Je moet deze binding dus goed kunnen breken. En dat gaat (naar mijn inziens) niet met water.
Ik dacht dat je de pH wat moest verhogen, zodat de strengen denatureren, dan zullen ze mee uitlogen.
Ik kan ook volledig mis zitten, ik ben namelijk geen expert!
-
- Berichten: 2.399
Re: Ionische sterkte verlagen
De opmerking van pinkpanter snijdt meer hout, maargoed dan is het mechanisme niet de ionsterkte verlagen wat de topicstarter aangeeft. Wat is je retentie mechanisme dus eigenlijk?
@Gerard, ik ben het met je eens dat ongebufferde systemen niet geweldig zijn.
@Gerard, ik ben het met je eens dat ongebufferde systemen niet geweldig zijn.
-
- Berichten: 9
Re: Ionische sterkte verlagen
Het enige dat hier voor retentie zorgt is de hybridisatie van de poly-A-staart met de geïmmobiliseerde oligo(dT)kolom.. Om dus het poly-A-bevattende mRNA te kunnen eluëren moeten in elk geval die A-T interacties weer dissociëren, en dat kan blijkbaar ook door het verhogen van de temperatuur of toevoegen van formamide.
Maar het verlagen van de ionische sterkte blijkt ook een manier te zijn.
Verdunnen lijkt een logische verklaring, maar ik kan moeilijk geloven dat we het mRNA van de kolom gaan krijgen door toevoegen van water..
Maar het verlagen van de ionische sterkte blijkt ook een manier te zijn.
Verdunnen lijkt een logische verklaring, maar ik kan moeilijk geloven dat we het mRNA van de kolom gaan krijgen door toevoegen van water..
