Springen naar inhoud

scheiden van aminozuren


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Milieuman

    Milieuman


  • 0 - 25 berichten
  • 11 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2009 - 11:05

Hoi,
in het labo hebben we een hydrolyse uitgevoerd op melk om hierin de eiwitten af te breken (door HCl toe te voegen). De bedoeling hier is om het aminozuur lysine te bepalen, door later de oplossing naar een pH van 9,74 te brengen (9,74 is de waarde waarbij lysine in zijn amfionvorm voorkomt).
Het geheel kleurde zwart en er werd bovendien een boel onzuiverheden gevormd die we erna hebben afgefiltreerd.
Nadien hebben we het geheel uitgedampt om de hoeveelheid HCl en water te verwijderen. Nu jah, nu is er nog een kleine hoeveelheid vloeistof over en er is ook neerslag gevormd. Weet iemand soms hoe we hieruit de lysine kunnen halen?

Opmerking:
normaal gezien is lysine niet mee verdampt want het heeft een kookpunt van boven de 200C

Zou het bovendien kunnen dat de lysine ook in de neerslag gevat zit, omdat er een oververzadiging heeft plaatsgevonden van de aminozuren door de grootste hoeveelheid vloeistof weg te dampen?

Hopelijk kan iemand me verder helpen,
dank u!!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

gadget

    gadget


  • >25 berichten
  • 77 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2009 - 15:18

Je zou solid phase extractie kunnen proberen, waarbij je een ionenwisselaar als cartridge gebruikt. Je moet dan even met de pH spelen om de lysine vast te houden of door te spoelen.

#3

RubenM

    RubenM


  • >250 berichten
  • 336 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2009 - 16:08

Zou je eens stapsgewijs kunnen opnoemen wat je precies doet? (dus iets gedetailleerder dan nu, wat doe je als eerste met de melk?)

Vanwaar de keuze om lysine te bepalen op basis van pH? Persoonlijk zou ik dit namelijk bijv. met HPLC doen...

#4

Milieuman

    Milieuman


  • 0 - 25 berichten
  • 11 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2009 - 19:25

Via HPLC gaat het niet want we hebben geen juiste reagentia voor de derivatisering van lysine. Daarom gaan we het via spectrometrie doen (derivatiseren met ninhydrine). Het is hierbij belangrijk dat we lysine kunnen scheiden omdat ninhydrine niet selectief werkt, dus een mengsel van aminozuren zou tot niets leiden.

Verder zal ik me nog eens over de SPE buigen.

Dank u!

#5

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 april 2009 - 06:57

SPE is een monstervoorbereidings techniek en geen detectie techniek, ik denk niet dat je de specificiteit kunt verkreigen met SPE. Kan je niet ninhydrine als derivatisatie reagents gebruiken en het dan schieten op de HPLC?

edit:
bingo op wikipedia

Ninhydrin is also used in amino acid analysis of proteins: Most of the amino acids are hydrolyzed and reacted with ninhydrin except proline; Also, certain amino acid chains are degraded. Therefore, separate analysis is required for identifying such amino acids that either react differently or don't react at all with ninhydrin. The rest of the amino acids are then quantified colorimetrically after separation by chromatography.

Veranderd door Napoleon1981, 04 april 2009 - 06:58






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures