HPLC

truepako

Goedendag iedereen,

Voor mijn practica ga ik werken met de HPLC. De kolom die ik heb is een reversed phase C18 kolom (de afmetingen weet ik niet).

Ik wil dus weten hoeveel ik van me component ik maximaal kan injecteren. Dit wil ik weten zodat ik de kolom niet overstuur hoef te maken. En zijn er ook bronnen waarbij deze waarden zijn weergeven?

Alvast bedankt!

truepako

O ja. Ik wil ook weten wat de detectiegrenzen van de kolom is.

PieTerDeBooMHuTBeWoNeR

Bij de injectie van je staal maakt het volume niet zoveel uit... Je injecteerd je staal eerst in een loop die waarna je er eluens laat door stromen. Bij ons zijn die loop's goed voor 20µL. (hangt gewoon aan een stickertje aan de loop zelf) Als je dus 50µL injecteerd zal er 30µL gewoon uitstromen in een klein afvalbekertje en 20µL zal naar de kolom gaan.

Hierdoor heb je dus steeds hetzelfde volume geïnjectreerd in je kolom wat dus vrij reproduceerbare resultaten oplevert..

Voor de detectiegrenzen nemen wij drie keer de ruis en dan reken wij om naar de concentratie voor die bepaalde component.

Ik hoop dat je er wat aan hebt.

ciao

FrankB

Het hangt vooral van je detector en te meten monster af, maar meestal meet je concentraties in mg/l (bijv. tussen 1 en 10 mg/L). Maar om zeker te zijn, kan je het eerst experimenteel bepalen door te kijken wat voor resultaat een bepaalde concentratie geeft. Of bijv. een reeks maken.

Edit: Voor injectievolume hanteren wij meestal de volgende vuistregels:

Als het oplosmiddel van het monster een grotere elutiekracht heeft dan de mobiele fase: 10-15 μL;

Als het oplosmiddel van het monster een kleinere elutiekracht heeft dan de mobiele fase: Vrijwel geen limieten

Of bij mobiele fase als oplosmiddel: Injecteer niet meer dan 1/6e van je piekvolume;

Of: Injecteer niet meer dan 10% van het kolomvolume.

Bron: Kromidas: Practical problem solving in HPLC

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

HPLC

HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC