Springen naar inhoud

DNA EN cDNA


  • Log in om te kunnen reageren

#1

life

    life


  • >25 berichten
  • 38 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 september 2009 - 11:20

Hoi allemaal,

Ik heb een andere vraag,

Hoe kan ik kiezen of ik uit genomisch DNA isoleert of uit cDNA voor een mutatie analyse?

zijn er verschillen tussen deze 2DNA s en hoe wordt cDNA gemaakt?

Welk DNA moet gebruiken voor de amplifacatie en waarom?

Kun je me mischien helpen?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Pink Panther

    Pink Panther


  • >250 berichten
  • 516 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 23 september 2009 - 18:21

cDNA staat voor copy DNA of complementair DNA. Eigenlijk is het niet meer dan een kunstmatige kopie van een mRNA streng naar DNA met behulp van een reverse transcriptase.
Er zijn dus geen biochemische verschillen tussen de beide strengen. Bijgevolg kan je ze beiden gebruiken in een PCR amplificatie. Je moet vooral kijken naar de toepassing en het verdere gebruik. Als je 'natuurlijk' DNA gaat amplificeren, dan zitten daar nog introns in en dergelijke. Omdat cDNA afkomstig is van mRNA, zijn die introns er al uitgeknipt. Dat is dan ook makkelijker te gebruiken voor expressies in bijvoorbeeld bacteriŽle cellen.

#3

Pink Panther

    Pink Panther


  • >250 berichten
  • 516 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 23 september 2009 - 18:27

Nog even verder reageren:

Als je een mutatie analyse wil maken, dan kan je ook twee wegen op.

Het is niet altijd zeker dat je gen tot uiting komt, zelfs niet als de cel goed getransformeerd zijn. Daarenboven is het moeilijker om mRNA te isoleren (gezien dat instabieler is) dan om DNA te isoleren. Dus is het meestal niet aangewezen om een mutatie analyse via een mRNA isolatie en dan een cDNA PCR te gaan doen.

Makkelijker lijkt me om het via het genomisch DNA te doen. Dat is makkelijker te isoleren. Gewoon een PCR op doen, en je kan zien of je mutant het gewenste gen bevat of niet.
Maar zoals ik al zei, het is niet omdat het gen er zit, dat het ook tot uiting komt. Als het gen geen duidelijk fenotype veroorzaakt, dan kan je beter niet via deze methode werken en toch kiezen voor een mRNA opzuivering. Als je dan een PCR product kan verkrijgen, dan ben je zeker dat je gen ook tot expressie gekomen is.

Nouja, voor zover ik het zie toch.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures