Laatste berichten
-
23:12
speciale rel. theorie 10
-
22:57
Straatklok loopt 5 minuten voor 11
-
22:57
wig 6
-
22:36
Gravity and gravitation 4
-
22:24
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 10
-
19:47
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
19:44
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
19:12
Rood laserlicht 3
-
17:30
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
16:34
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
13:57
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
13:16
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
13:12
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
10:15
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
-
23 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
Moderator: ArcherBarry
Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
-
- Berichten: 7
niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
Ik moet een HPLC methode valideren waarbij ik een mirtazapine achtige verbinding moet bepalen met een gebufferde mobiele fase pH 7,4. Visueel gezien lijkt er op basis van mijn chromatogrammen geen spraken van overbelading / meten buiten het lineair dynamisch bereik van mijn detector. Toch gaat mijn 1e orde regressielijn niet door 0 (omsluit 95% BI niet) en ook uit de residual plot blijkt dat er spraken is van een 2e orde model. De ijklijn vlakt over de range van 10 tot 150% niet af. De eerste levels liggen onder de lijn, daarna liggen mijn punten boven de lijn en de laatste levels liggen weer onder de lijn. Het product heeft een UV maximum van 200 nm. De methode meet op de helling van het UV spectrum bij 220 nm. Ook in het lage gebied van 0,05 tot 1% is het verband niet lineair, maar polynomial. Kan dit beeld veroorzaakt worden door kolom interacties? (ik gebruike en base deactivated silica kolom) Is het verschijnsel product gerelateerd of hangt het samen met mijn detectie? Wie kan me uitleggen wat ik hier waarneem. Kom er zelf en met fabrikanten niet uit.
-
- Berichten: 677
Re: niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
Kan je de concentraties / piekoppervlakten opgeven?
Eventueel ook de rest van de methode: kolomafmetingen, debiet, mobiele fase samenstelling.
Heb je ook eens een blanco geïnjecteerd?
Eventueel ook de rest van de methode: kolomafmetingen, debiet, mobiele fase samenstelling.
Heb je ook eens een blanco geïnjecteerd?
-
- Berichten: 7
Re: niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
De blanco's bevatten een kleine piek die onder de hoofdpiek valt, de bijdrage van deze piek is echter verwaarloosbaar en in verhouding overal even groot (constant niveau in 10 blanco's). de mobiele fase is 400 ACN:100 fosfaatbuffer pH 7,5:500 MeOH. Concentratie van mijn oplossing is 20 mg/25ml (100%) niveau en dus 0,2 mg/25 ml op 1% niveau. De kolom is een 25 cm, 4.6 mm, 5um deeltjes base deactivated silica kolom. Areas liggen rond de 8000 mAU*S op 100% niveau en 79 mAU*S op 1% niveau. De flow is 1,0 ml/min
-
- Berichten: 677
Re: niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
Er is in elk geval niets mis met de keuze van de kolom of de mobiele fase. In principe moet dat werken.
Wat ik zo voor de vuist kan bedenken: de concentratie van je analyt is vrij hoog: 20 mg/25 mL is 800 ppm, maar anderzijds is de curve bljkbaar ook niet lineair in het lage concentratiegebied. Ikzelf heb al ijkcurven gezien die maar lineair waren tot ca. 4 ppm
Zorg ervoor dat de buffercapaciteit groot genoeg is: De fosfaatbuffer in de waterige eluent component moet min. 20 mM (en liefst niet hoger dan 50 mM) zijn. Zijn de retentietijden voldoende reproduceerbaar?
Zorg ervoor dat de absorbantie bij het piekmaximum zeker niet boven 1 gaat (en bij voorkeur niet hoger dan 0,8)
Ter illustratie, één van mijn ijkcurven: de eerste is genomen over een breed concentratiegebied (0 tot 21 ppm) ; het verband lijkt kwadratisch te zijn:
Als we het concentratiegebied beperken van 0 tot 4 ppm, is de curve wel degelijk lineair:
Mijn ervaring is ook dat de precisie kan verhoogd worden door oplossingen gravimetrisch te maken: In plaats van 1 mL te pipetteren, WEEG hoeveel je precies hebt toegevoegd.
Wat ik zo voor de vuist kan bedenken: de concentratie van je analyt is vrij hoog: 20 mg/25 mL is 800 ppm, maar anderzijds is de curve bljkbaar ook niet lineair in het lage concentratiegebied. Ikzelf heb al ijkcurven gezien die maar lineair waren tot ca. 4 ppm
Zorg ervoor dat de buffercapaciteit groot genoeg is: De fosfaatbuffer in de waterige eluent component moet min. 20 mM (en liefst niet hoger dan 50 mM) zijn. Zijn de retentietijden voldoende reproduceerbaar?
Zorg ervoor dat de absorbantie bij het piekmaximum zeker niet boven 1 gaat (en bij voorkeur niet hoger dan 0,8)
Ter illustratie, één van mijn ijkcurven: de eerste is genomen over een breed concentratiegebied (0 tot 21 ppm) ; het verband lijkt kwadratisch te zijn:
Als we het concentratiegebied beperken van 0 tot 4 ppm, is de curve wel degelijk lineair:
Mijn ervaring is ook dat de precisie kan verhoogd worden door oplossingen gravimetrisch te maken: In plaats van 1 mL te pipetteren, WEEG hoeveel je precies hebt toegevoegd.
-
- Berichten: 7
Re: niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
De absorbantie bij het UV maximum (200 nm) gaat zeker over de 1. We zien dit o.a. terug als we UV piek purity bepalen. We meten echter bij 220 nm en hier blijven we wel onder de 1. Zelf heb ik het idee dat hier mogelijk de oorzaak gezocht moet worden, maar ik kan hier in literatuur geen direct antwoord op vinden. Jooken, kan jij mij hier mogelijk meer over vertellen?
-
- Berichten: 677
Re: niet lineair verband concentratie en UV absorptie2
Als ik jou was zou ik eens kritisch naar de chromatogrammen kijken:
- is de top van de piek mooi scherp? (geen "sigaar" of "vierkante"-top)
- Allicht kan je een overlay doen van chromatogrammen van verschillende concentraties. Kijk eens of de piekvorm niet verandert. Je kan dit zeer makkelijk zien door het chromatogram met de laagte conc te vermenigvuldigen met een factor zodat de piek evenhoog is als de hoogste conc.
- wordt de intergratie altijd op een consequente wijze door de software berekend?
- Zit er niet teveel ruis op het chromatogram?
Verder is dit geen evident probleem (anders had je de oplossing al zelf gevonden), dus vanalles proberen is de boodschap.
- is de top van de piek mooi scherp? (geen "sigaar" of "vierkante"-top)
- Allicht kan je een overlay doen van chromatogrammen van verschillende concentraties. Kijk eens of de piekvorm niet verandert. Je kan dit zeer makkelijk zien door het chromatogram met de laagte conc te vermenigvuldigen met een factor zodat de piek evenhoog is als de hoogste conc.
- wordt de intergratie altijd op een consequente wijze door de software berekend?
- Zit er niet teveel ruis op het chromatogram?
Verder is dit geen evident probleem (anders had je de oplossing al zelf gevonden), dus vanalles proberen is de boodschap.